實時熒光定量PCR服務（qPCR）概述

實時熒光定量PCR（quantitative Real-time PCR，簡稱qPCR）是一種在聚合酶鏈式反應（PCR）進行的同時，通過熒光信號實時監(jiān)測擴增過程的技術(shù)。這種方法允許在PCR擴增過程中收集數(shù)據(jù)，而不是在擴增結(jié)束后進行測定，從而實現(xiàn)了對起始模板數(shù)量的定量分析。實時熒光定量PCR廣泛應用于基因表達分析、病原體檢測、基因分型等領(lǐng)域。

實時熒光定量PCR服務的原理

實時熒光定量PCR的核心在于使用熒光標記的探針或染料，這些熒光標記物在PCR擴增過程中與目標DNA或RNA結(jié)合，隨著擴增產(chǎn)物的增多，熒光信號也隨之增強。通過監(jiān)測這些熒光信號的積累，可以實時跟蹤PCR反應的進展。在指數(shù)擴增期，模板的起始拷貝數(shù)與循環(huán)閾值（Ct值）之間存在線性關(guān)系，這一關(guān)系被用于定量分析。

實時熒光定量PCR的方法

實時熒光定量PCR有兩種主要的檢測方法：

  1.SYBR Green I染料法：使用非特異性的SYBR Green I染料與所有雙鏈DNA結(jié)合，通過監(jiān)測熒光信號的增加來定量PCR產(chǎn)物。這種方法簡單且成本較低，但需要通過熔解曲線分析來確認擴增產(chǎn)物的特異性。

  2.TaqMan探針法：使用特異性的熒光探針，探針在PCR擴增過程中被Taq DNA聚合酶的5'→3'外切酶活性切割，釋放出熒光信號。這種方法的特異性較高，但需要合成特定序列的探針，成本相對較高。

實時熒光定量PCR的儀器和應用

實時熒光定量PCR通常需要專門的儀器，如實時熒光定量PCR儀，這些儀器配備了高靈敏度的光學系統(tǒng)和精確的溫控技術(shù)，能夠?qū)崟r監(jiān)測熒光信號并提供穩(wěn)定的溫度循環(huán)。實時熒光定量PCR儀的軟件還能夠自動分析數(shù)據(jù)，生成Ct值、擴增曲線和熔解曲線等關(guān)鍵信息。

實時熒光定量PCR在臨床診斷、病原體檢測、藥物療效評估、腫瘤基因檢測等多個領(lǐng)域都有重要應用。例如，在xin冠病毒核酸檢測中，實時熒光定量PCR技術(shù)被廣泛使用，因為它具有靈敏度高、檢測快速、污染小等優(yōu)點。

實時熒光定量PCR的優(yōu)勢

實時熒光定量PCR相較于傳統(tǒng)PCR具有多方面的優(yōu)勢，包括：

  1.可以定量分析未知模板的數(shù)量。

  2.檢測靈敏度高，可以檢測到極少量的目標核酸。

  3.無需進行凝膠電泳等后續(xù)步驟，節(jié)省時間并提高效率。

  4.可以進行實時監(jiān)測，提供更多關(guān)于PCR反應動態(tài)的信息。

實時熒光定量PCR是分子生物學和臨床診斷中bu可或缺的技術(shù)之一，隨著技術(shù)的不斷進步，其應用范圍和準確性也在不斷提高。